PCR计算器
内容提要
“老董工具箱”提供在线PCR计算器，可根据反应总体积、模板DNA浓度与体积、引物工作及储存浓度、Master Mix体积等参数，计算各组分体积和终浓度，并推荐PCR程序。文中还列出标准25 μL体系配方及预变性、变性、退火、延伸等步骤，并简介PCR原理。
延伸解读
参数设置与计算逻辑
计算器需要输入反应总体积、模板DNA浓度与体积、引物工作及储存浓度、Master Mix体积等参数。其中模板DNA浓度用于计算模板体积，引物工作浓度和储存浓度可能用于计算引物稀释或添加量。用户需根据实际实验条件填写，以确保各组分体积和终浓度计算准确。
标准体系与程序参考
文章提供了标准25 μL PCR体系配方，包括2× Master Mix 12.5 μL、正向和反向引物（10 μM）各1.0 μL、模板DNA 1.0-2.0 μL，并用ddH₂O补足。同时给出了标准PCR程序：预变性95°C 3-5分钟，变性95°C 30秒，退火55-65°C 30秒（30-35循环），延伸72°C 1分钟/kb，终延伸72°C 5-10分钟。这些可作为实验起始参考。
使用注意事项
使用计算器时，需注意引物工作浓度与储存浓度的区别，以及Master Mix的浓度（如2×）。模板DNA浓度和体积为可选输入，若填写则用于计算模板体积。计算结果是基于输入参数的推荐值，实际实验可能需要根据酶、引物和模板特性进行优化。
Q&A
PCR计算器能计算哪些参数？
PCR计算器可根据反应总体积、模板DNA浓度与体积、引物工作及储存浓度、Master Mix体积等参数，计算各组分体积和终浓度，并推荐PCR程序。
标准25 μL PCR反应体系如何配制？
标准25 μL PCR体系：2× Master Mix 12.5 μL，正向引物(10 μM) 1.0 μL，反向引物(10 μM) 1.0 μL，模板DNA 1.0-2.0 μL，ddH₂O补至25 μL。
PCR程序中的退火温度和时间是多少？
退火温度为55-65°C，时间30秒，循环30-35次。
PCR的延伸时间如何设置？
延伸温度为72°C，时间按1分钟每kb设置。
PCR的基本原理是什么？
PCR（聚合酶链式反应）是一种体外扩增DNA的技术，通过反复的变性、退火、延伸三个步骤，在短时间内大量扩增特定的DNA片段。
PCR预变性和终延伸的条件是什么？
预变性：95°C，3-5分钟；终延伸：72°C，5-10分钟。
